Targeting Hematopoietic Cells Using a Blimp-1 Promoter Helper Dependent Adenoviruses.
Notice bibliographique
Résumé
Abstract B lymphocyte-induced maturation protein-1 (Blimp-1) plays a key role in the maturation of B lymphocytes into end-stage, antibody-screting plasma cells. However its promoter region has not been well characterized. As an initiative aimed at identifying plasma cell specific promoters for use in gene therapy of myeloma, we studied the function of the blimp-1 promoter in a helper-dependent adenovirus (HDAd) vector system. The advantages of employing HDAd include: 1) High capacity encompassing transgene (upto 36 kb); 2). Higher and longer transgene expression; 3). Lower cytotoxicity in vivo; 4). Improved specificity for tissue-specific promoters. Blimp-1 promoter fragments of 2.6, 4.7 and 25 kb driving the luciferase gene were cloned into HDAd precursor plasmid and then rescued into HDAd vectors. A panel of B lymphoma and myeloma cell lines were infected with these HDAd vectors and a positive control vector HDMCMV (an HDAd vector expressing luciferase under the control of MCMV promoter) at an MOI of 2,000 particles/cell. Two days after infection, very high luciferase activity was demonstrated in human myeloma cell lines (KMS11, U266, MM1, and MY5 cells), but low or no activity was seen in human B lymphoma cell lines (Namalwa and Raji). In fibroblasts, the Blimp-1 derived promoter activity appeared to be high in COS7 cells but 10 times lower in NIH3T3 cells. All three differently sized promoter fragments of Blimp-1 demonstrated similar activity. Next we further tested these three Blimp1/Luc HDAd vectors in mice using HDMCMV as a positive control. Six week old FVB mice were intravenously injected with 1X10(e11) particles per mouse. Different tissues were assayed for luciferase activity three days after injection. The control HDMCMV virus directed the highest luciferase activity in the liver because of the tropism of adenovirus. However, the Blimp-1/luciferase viruses directed highest luciferase expression in the spleen and bone marrow with lower level relative expression in the liver and trace amount or no expression in other tissues examined. After normalization, the transciptional activity of the Blimp-1 promoter is ~80 fold higher than the CMV promoter in spleen tissue. All three Blimp-1 promoters demonstrated similar activity, indicating that the 2.6 kb Blimp promoter contains the regulation element for spleen and bone marrow-specific gene expression. FACS analysis of spleen cells co-stained with luciferase antibody revealed luciferase expression in both B220+ve B and B220-ve non-B cells. Taking together, we conclude that 2.6kb blimp-1 promoter sequence is enough to direct gene expression to hematopoietic cells but is not B cell specific.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».