Galectin-3 Binding Protein Contaminates the Purification of Recombinant Factor IX.
Notice bibliographique
Résumé
Abstract The hemophilas are the most common severe hereditary bleeding disorders. The standard treatment of these disorders is to infuse plasma concentrates of the missing coagulation factor. However, the high cost of replacement therapy and the serious morbidity from the transmission of infectious agents have mandated a need for alternative therapeutic strategies. One of these strategies is gene therapy and we embarked on a novel gene therapeutic strategy involving the use of factor IX-transduced bone marrow stroma to treat hemopihlia B, a deficiency of the gamma-carboxylated protein, factor IX. The rate limiting step for the production of factor IX is gamma-carboxylation, a post translational modification carried out only in mammalian cells. In order to test the carboxylation efficiency of our gene therapeutic platform, we first transfected Human Embryonic Kidney (HEK) 293 cells with a retroviral construct containing factor IX. Factor IX was purified by immunoaffinity chromatography and then subject to hydroxyapatite chromatography to isolate biologically active properly carboxylated factor IX from inactive uncarboxylated factor IX. Unexpectedly, during hydroxyapatite chromatography, we discovered that purified factor IX was contaminated by a heretofore unknown protein. Further analysis by mass spectrometry sequencing revealed this protein to be galectin-3 binding protein (G3BP).G3BP contaminates media of HEK293 cells regardless of whether factor IX is transfected into these cells. Furthermore, the contamination of purified media is not specific for factor IX as G3BP is isolated regardless of the antibody used for purification. In summary, the above results provide important information regarding the production of recombinant factor IX and uncover a potentially new contaminant in recombinant products produced in mammalian cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».