Production and Purification of Recombinant Human Oviduct-Specific Glycoprotein (rhOGP) and the Role of rhOGP in Sperm Capacitation and Acrosome Reaction.
Notice bibliographique
Résumé
The secretory cells lining the lumen of mammalian oviducts synthesize and secrete a major glycoprotein known as oviduct-specific glycoprotein (OGP) or oviductin which has been shown to interact with gametes and early embryos. We report here the use of recombinant DNA technology to produce human OGP in HEK-293 cells. A full-length cDNA clone of human OGP was constructed in an expression vector pCMV6. For the establishment of stable colonies expressing human oviductin, HEK-293 cells were transfected with human OGP cDNA. Single colonies were obtained by limiting dilution in medium supplemented with Genecticin. Colonies were screened for expression levels by immunoblot analysis of culture supernatants. HEK-293 cells stably expressing recombinant human OGP (rhOGP) were maintained in the medium supplemented with Genecticin. We utilized the CELLSPIN cell cultivation system to produce large quantities of rhOGP in stably transfected cells. Production of rhOGP from the culture medium was monitored by immunoblotting. The medium was collected and concentrated by dialysis against polyethylene glycol. The concentrated medium was further dialyzed against phosphate buffer prior to initiating cation exchange chromatography. Fractions containing the eluted proteins were analyzed by immunoblotting. These fractions were then pooled and concentrated by centrifugal filtration for size exclusion chromatography. Fractions were collected in the size range of oviductin. Upon gel electrophoresis, purified rhOGP yielded a single band corresponding to the 120-150 kDa size range of human OGP reported in literature. Subsequent mass spectrometric analysis of the purified rhOGP revealed its identity as human oviduct-specific glycoprotein. Preliminary in vitro functional studies showed that addition of rhOGP in the capacitation medium further enhance tyrosine phosphorylation of human sperm proteins in a time-dependent manner. After 4 hours of incubation in the presence of rhOGP, an increase in both spontaneous and A23187-induced acrosome reaction was measured. The successful production of rhOGP can now facilitate the study of the role of human OGP in fertilization and early embryo development. (Supported by the Canadian Institutes of Health Research - Grant #MOP93606) (poster)
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».