IN UTERO GENE DELIVERY USING CHITOSAN-DNA NANOPARTICLES IN MICE
Notice bibliographique
Résumé
Background:In utero gene therapy is a noveltherapy for monogenic disorders of the fetus. Viral vector-mediated gene transfer risks endogenous viral recombination, and random transgene insertion causing insertional mutagenesis. Enhanced biosafety alternatives include non-viral vectors such as the complex polymer, chitosan. The purpose of this study was toevaluate chitosan-mediated transfection in a murine model of fetal genetherapy. Methods: 1. Chitosan colloidal suspensions wereprepared, and particle size analysis in amniotic fluid (AF) was performed using a zetasizer. 2. Plasmid enhanced green fluorescent protein (eGFP)-chitosan constructs were prepared and protection from endogenous digestion in AF was analyzed by gel electrophoresis. 3. 0.25x105 HEK293T cells were transfected over 2 hours with 0.6 ?g of chitosan-peGFP in varying proportions of medium and AF. After 48 h, cells were directly imaged by fluorescence microscopy for eGFP expression and fluorescence activated cell sorting (FACS) sorting was done to determine transfection efficiency. 4. Amniotic sacs of time-mated CD-1 mice were injected with 30 ?L chitosan-peGFP (12.5 ug DNA) on G17. Following natural birth, pupswere sacrificed and tissues were examined for eGFP DNA and mRNA by DNA PCR, RT-PCR, and fluorescence microscopy. Results: Chitosan forms aggregates in AF, and although in vitro transfection efficiency is decreased by AF, eGFP-chitosan delivery into AF achieves transfection and transgene expression in lung and intestine of mice after birth. Conclusions: In utero delivery of eGFP plasmid by chitosan results in postnatal gene expression, and shows promise for non-viral gene transfer in animal models of fetal gene therapy. P.T.P.Y. is supported by a Child and Family–UBCMD/PhD Studentship Award.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,003 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».