The role of THOA in calcium sensitization in human myometrial smooth muscles
Notice bibliographique
Résumé
Improved understanding of the regulation of contractions of uterine smooth muscle (myometrium) is essential to develop more successful strategies for prevention of premature birth, which remains the most common cause of infant death and disability. Oxytocin (OT) and prostaglandin (PG) F2a are potent myometrial stimulants which induce an increase in intracellular Ca++. This activates myosin light chain kinase (MLCK) and subsequently the cell’s contractile machinery. However, there is poor correlation between the rise in Ca++ and the strength of the myometrial contraction. Contractile strength greatly increases at the time of parturition partly due to Ca++-independent factors that sensitize the muscle to the rise in intracellular Ca++. In vascular smooth muscle, one key regulator in this process of Ca++ sensitization is the monomeric G-protein, RhoA which in turn activates Rho-associated kinase (ROK). Studies in the rat myometrium have shown that RhoA and ROK are involved in enhancing OT-induced contractions. The potential role of the RhoA/ROK system in uterine contractility at the time of parturition has not been investigated in the human myometrium or in human cell lines. We propose to investigate the role of RhoA/ROK in the human myometrium using molecular cloning techniques. We have constructed expression plasmids for wild type, dominant positive (constitutively active), and dominant negative (constitutively inactive) isoforms of RhoA and synthesized purified proteins using a bacterial (BL21) translation system. These constructs will be introduced into primary and immortalized human myocytes using the protein transduction domain (TAT) derived from the HIV virus, which is capable of introducing whole proteins into mammalian cells. RhoA activation/translocation to the plasma membrane will be visualized using real time confocal microscopy in experiments where the RhoA proteins have been tagged with green fluorescent protein (GFP). Following introduction of the normal and mutant G-proteins, the downstream targets of activated ROK will be assayed for phosphorylation status using near infrared (NIR) fluorescence imaging of western blots or in-cell westerns. These targets include the myosin binding subunit (MBS) of myosin light chain phosphatase (MLCP), and two peptide phosphatase inhibitors of MLCP, CPI-17 and PHI-1. In addition, we propose to measure ROK activity directly using a direct enzyme assay. We will monitor calcium transients using fluorescence microscopy to verify the calcium independence of our measurements. These experiments will determine the role of the RhoA/ROK system in the mechanisms that may determine human uterine contractility. This information may direct new strategies to prevent or treat preterm labour.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».