Proteolytic cleavage of the hydrophobic domain in the CaVα2δ1 subunit improves assembly and activity of cardiac CaV1.2 channels
Notice bibliographique
Résumé
Voltage-gated L-type Ca V 1.2 channels in cardiomyocytes exist as heteromeric complexes with the pore-forming Ca V α1, Ca V β, and Ca V α2δ1 subunits. The full complement of subunits is required to reconstitute the native-like properties of L-type Ca 2+ currents, but the molecular determinants responsible for the formation of the heteromeric complex are still being studied. Enzymatic treatment with phosphatidylinositol-specific phospholipase C, a phospholipase C specific for the cleavage of glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins, disrupted plasma membrane localization of the cardiac Ca V α2δ1 prompting us to investigate deletions of its hydrophobic transmembrane domain. Patch-clamp experiments indicated that the C-terminally cleaved Ca V α2δ1 proteins up-regulate Ca V 1.2 channels. In contrast, deleting the residues before the single hydrophobic segment (Ca V α2δ1 Δ1059–1063) impaired current up-regulation. Ca V α2δ1 mutants G1060I and G1061I nearly eliminated the cell-surface fluorescence of Ca V α2δ1, indicated by two-color flow cytometry assays and confocal imaging, and prevented Ca V α2δ1-mediated increase in peak current density and modulation of the voltage-dependent gating of Ca V 1.2. These impacts were specific to substitutions with isoleucine residues because functional modulation was partially preserved in Ca V α2δ1 G1060A and G1061A proteins. Moreover, C-terminal fragments exhibited significantly altered mobility in denatured immunoblots of Ca V α2δ1 G1060I and Ca V α2δ1 G1061I, suggesting that these mutant proteins were impaired in proteolytic processing. Finally, Ca V α2δ1 Δ1059–1063, but not Ca V α2δ1 G1060A, failed to co-immunoprecipitate with Ca V 1.2. Altogether, our data support a model in which small neutral hydrophobic residues facilitate the post-translational cleavage of the Ca V α2δ1 subunit at the predicted membrane interface and further suggest that preventing GPI anchoring of Ca V α2δ1 averts its cell-surface expression, its interaction with Ca V α1, and modulation of Ca V 1.2 currents.
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
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machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
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