Development of GMP-Compatible Protocols for Thymus-Derived Regulatory T Cell Expansion
Notice bibliographique
Résumé
Introduction: Animal and early clinical studies have shown that regulatory T cell (Treg) therapy can prevent graft-versus-host disease (GVHD) following hematopoietic stem cell transplant. Despite these promising results, challenges remain in administering Treg therapy including the difficulty in isolating pure Tregs and expanding them to a therapeutic dose. We have previously found that the thymus, which is routinely removed during pediatric cardiac surgery, is a plentiful source of Tregs. These Tregs can be easily isolated, and can prevent xenoGVHD in mice. However, to use this therapy in humans, standard GMP-compliant methods for isolation and large-scale expansion of thymic Tregs must be developed. Methods: CD4+CD8-CD25+ thymic Tregs were isolated from pediatric thymuses using GMP-compatible magnetic bead-based separation. Tregs were expanded using artificial antigen-presenting cells or GMP-compatible antibody tetramer complexes that stimulate CD3 and CD28, with or without additional activation of CD2. Cells were cultured with rapamycin and IL-2, and were restimulated after 7 days without rapamycin. Results: Thymic Tregs expand in vitro when cultured with tetrameric antibody complexes. About 50-fold expansion was achieved using the anti-CD3/CD28/CD2 antibody tetramers, which represents the expansion that will be necessary to reach a clinically relevant dose. A higher expansion rate was obtained using the anti-CD3/CD28/CD2 antibody tetramer complexes than the anti-CD3/CD28. Cells cultured with these antibody tetramers express high levels of FOXP3, similar levels of Treg-characteristic markers as those expanded with artificial antigen-presenting cells, and do not produce inflammatory cytokines. Conclusion: Thymic Tregs can be isolated and expanded with GMP-compliant methods. Once the protocol is optimized, we can transfer our protocols to a GMP facility for further process development and to generate data required for a clinical trial application. We are the first group to pursue clinical application using allogeneic thymic Tregs, which provide an opportunity for an “off-the-shelf” therapy to treat GVHD. Canadian National Transplant Research Program.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».