An Isocratic High-Performance Liquid Chromatographic Assay for CYP7Al-Catalyzed Cholesterol 7wHyciroxylation
Notice bibliographique
Résumé
CYP7A1, which is the only CYP7A subfamily P450 tdentified to date ( 1 ), catalyzes cholesterol 7α-hydroxylation, the first, and rate-limiting, step in the converston of cholesterol to bile acids. CYP7Al has been Isolated from human liver and purified to apparent homogeneity ( 2 ). Rodent-model studies have established that CYP7A1 is highly regulated by physiological factors that influence hepatic-bile-acid biosynthesis, including cholesterol feedmg, dmrnal factors, and bile acids, whtch feedback-inhibit the overall btosynthetlc pathway in large part at the level of CYP7A1 gene expression ( 3 ). Relatrvely little is known about the regulation of human CYP7A1, although liver biopsy analyses have shown that hepatic CYP7A1 protem content is elevated in patients treated with the bile-acid sequesterant cholestyramme ( 4 ). Purified CYP7A1 is catalytically active in cholesterol 7α-hydroxylation ( 2 ) and immunoinhibition experiments with antihuman CYP7A1 antibodies have shown that CYP7A1 accounts for most of the cholesterol 7a-hydroxylase acttvtty in human liver microsomes ( 4 ). Thus, mlcrosomal cholesterol 7α-hydroxylase activity can be used as a marker for human liver CYP7A1. Several analytical methods have been developed to quantify hepatrc mrcrosomal cholesterol 7α-hydroxylation, including reversed-phase high-performance hquid chromatography (RPHPLC) ( 5 ), isotope dilution-mass spectrometry ( 6 ) and thin-layer chromatography (TLC) ( 7 ). This chapter describes a normal-phase, isocratic HPLC assay for the determination of cholesterol 7α-hydroxylase acttvity based on the conversion by cholesterol oxidase of the primary P450 metabohte 7α-hydroxycholesterol to 7α-hydroxy-4-cholesten-3-one, which can be detected at 254 nm. These keywords were added by machine and not by the authors. This process is experimental and the keywords may be updated as the learning algorithm improves.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,004 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,007 | 0,004 |
| Études des sciences et des technologies | 0,002 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,003 | 0,002 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,004 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,005 | 0,007 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».