Small GTPases and BAR domain proteins regulate branched actin to make clathrin and dynamin independent endocytic vesicles
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Numerous endocytic pathways operate simultaneously at the cell surface. Here we focus on the molecular machinery involved in the generation of endocytic vesicles of the clathrin and dynamin-independent CLIC/GEEC (CG) pathway. This pathway internalises many GPI-anchored proteins and a large fraction of the fluid-phase in different cell types. We developed a real-time TIRF assay using pH-sensitive GFP-GPI to identify nascent CG endocytic sites. The temporal profile of known CG pathway modulators showed that ARF1/GBF1 (GTPase/GEF pair) and CDC42 (RhoGTPase) are recruited sequentially to CG endocytic sites, ∼60s and ∼9s prior to scission. Using a limited RNAi screen, we found several BAR domain proteins affecting CG endocytosis and focused on IRSp53 and PICK1 that have interactions with CDC42 and ARF1 respectively. IRSp53, an I-BAR domain containing protein, was recruited to the plasma membrane at the site of forming CG endocytic vesicles and in its absence, nascent endocytic CLICs, did not form. The requirement for actin polymerization in the CG pathway suggested a role for nucleators of actin polymerization, and ARP2/3 was found enriched at the site of the forming endocytic vesicle. PICK1, a BAR domain containing protein and the ARP2/3 inhibitor is recruited at an early stage along with ARP2/3, but is removed from the endocytic site coincident with CDC42 recruitment and a burst of Factin polymerization. This study provides a spatio-temporal understanding of the molecular machinery necessary to build a CG endocytic vesicle.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».