Development of a metal-based detection method for simultaneous protein and gene expression analysis in single cells by mass cytometry
Notice bibliographique
Résumé
Abstract The Fluidigm® CyTOF system is a mass cytometer that uniquely enables high-dimensional single-cell analysis of complex populations. Mass cytometry is based on inductively coupled plasma time-of-flight mass spectrometry used for multiplex proteomic analysis. In this approach, metal-conjugated affinity reagents are used to tag the components of cells. The cells are nebulized and sent to an argon plasma, ionizing the multi-atom metal tags, which are then analyzed by a time-of-flight mass spectrometer. Gene expression can be finely tuned through the synthesis of RNA and through the control of its stability and location. Misregulation of gene expression can have severe consequences, such as developmental disorders, cancer and autoimmune diseases. The ability to acquire complete spatial-temporal profiles of gene expression is therefore critical for the understanding of disease pathophysiology, medical diagnostics and drug discovery. In this presentation, we discuss the development of a multiplex method for targeted RNA detection using the Fluidigm CyTOF® and Advanced Cell Diagnostics RNAscope® platforms. This novel assay includes the hybridization of RNA-specific target probes, followed by signal amplification and ending with the binding of amplifier-specific metal-labelled probes. Presently, we are able to detect four different mRNA probes in a single-cell analysis setting. The detection of RNA is compatible with Fluidigm products such as Maxpar® antibodies. Future developments will include high-dimensional detection that enables researchers to investigate the simultaneous expression profile of RNA and protein across millions of cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».