Synergic “Click” Boronate/Thiosemicarbazone System for Fast and Irreversible Bioorthogonal Conjugation in Live Cells
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
Fast, high-yielding, and selective bioorthogonal “click” reactions employing nontoxic reagents are in high demand for their great utility in the conjugation of biomolecules in live cells. Although a number of click reactions were developed for this purpose, many are associated with drawbacks and limitations that justify the development of alternative systems for both single- or dual-labeling applications. Recent reports have highlighted the potential of boronic ester formation as a bioorthogonal click reaction between abiotic boronic acids and diols. Boronic ester formation is a fast dehydrative process; however it is intrinsically reversible in aqueous medium. We designed and optimized a synergic system based on two bifunctional reagents, a thiosemicarbazide-functionalized nopoldiol and an ortho -acetyl arylboronic acid. Both reagents were shown to be chemically stable and nontoxic to HEK293T cells at concentrations as high as 50 μM. The resulting boronate/thiosemicarbazone adduct is a medium-sized ring that forms rapidly and irreversibly without any catalyst at low μM concentrations, in neutral buffer, with a rate constant of 9 M –1 s –1 as measured by NMR spectroscopy. Control experiments in the presence of competing boronic acids showed no crossover side-products and confirmed the stability and lack of reversibility of the boronate/thiosemicarbazone conjugates. Formation of the conjugates is not affected by the presence of biological diols such as fructose, glucose, and catechol, and the thiosemicarbazide-functionalized nopoldiol is inert to aldehyde electrophiles of the sort found on protein-bound glyoxylyl units. The suitability of this system in the cell-surface labeling of live cells was demonstrated using a SNAP-tag approach to install the boronic acid reagent onto the extracellular domain of the Beta-2 adrenergic receptor in HEK293T cells, followed by incubation with the optimal thiosemicarbazide-functionalized nopoldiol reagent labeled with fluorescein dye. Successful visualization by fluorescence microscopy was possible with a reagent concentration as low as 10 μM, thus confirming the potential of this system in biological applications.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle