Production of the extracellular domain of Siglec-9 using and an E.coli expression system and generation of anti-Siglec-9 antibodies
Notice bibliographique
Résumé
694 Sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins (Siglecs) are a subset of the immunogluobulin superfamily of cell surface receptors that mediate protein-carbohydrate interactions through their ability to bind sialic acid moieties found on glycolipids and glycoproteins. Siglecs are mainly expressed on white blood cells and play a critical role in cell-cell interactions and signaling functions in the hematopoietic, immune, and nervous systems. The human Siglec family is composed of 11 genes. In addition to well-characterized Siglecs such as the myeloid receptor (Siglec-3/CD33), seven additional Siglecs (Siglec 5-11) with high sequence similarity to Siglec-3 and collectively referred to as Siglec-3-related genes have been identified in recent years. Anti-CD33/Siglec-3 antibodies have recently been used for diagnosis of acute myeloid leukemia (AML). The development of Siglec-3 antibody-targeted chemotherapy, as well as emergence of anti-Siglec-5 antibodies as a potential marker and therapeutic reagent for AML has prompted the characterization of other newly identified Siglecs. Siglec-9 is one of the newly identified members of the Siglec gene family. Similar to other Siglec-3-related genes, Siglec-9 is located on chromosome 19q 13.3-4 in close proximity to the kallikrein gene locus. Siglec-9 is composed of an N-terminal V-set Ig domain that mediates sialic acid binding, two C2-set Ig domains, a transmembrane region and a cytoplasmic tail that harbors two immune receptor tyrosine-based inhibitory motifs (ITIMs). Here we report the production of the extracellular domain of Siglec-9 using an E.coli protein expression system. Total bone marrow mRNA was reverse-transcribed to cDNA. Polymerase chain reaction using Siglec-9 specific primers was conducted. The PCR product was cloned into pET-200 TOPO plasmid vector and the construct was used to transform E.coli strain BL21(DE3) for protein production. Following identification by mass spectroscopy, recombinant Siglec-9 containing an N-terminal polyhistidine (6xHis) tag was purified to homogeneity using metal affinity chromatography and was used as immunogen for antibody production in rabbit and mice. Anti-Siglec-9 polyclonal and monoclonal antibodies were produced and used in flow-cytometric analysis of lymph nodes obtained from patients with hematological malignancies. 7 out of 8 patients with B-cell lymphoma were positive. We conclude that Siglec-9 may be a new surface marker of patients with B-cell lymphoma.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».