Atomic mass tag of bismuth‐209 for increasing the immunoassay multiplexing capacity of mass cytometry
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Mass cytometry (or CyTOF) is an atomic mass spectrometry‐based single‐cell immunoassay technology, which has provided an increasingly systematic and sophisticated view in basic biological and clinical studies. Using elemental reporters composed of stable heavy metal isotopes, more than 50 cellular parameters are measured simultaneously. However, this current multiplexing does not meet the theoretical capability of CyTOF instrumentation with 135 detectable channels, primarily due to the limitation of available chemistries for conjugating elemental mass tags to affinity reagents. To address this issue, we develop herein additional metallic mass tag based on bismuth‐209 (209 Bi) for efficient conjugation to monoclonal antibody. This enables the use of an addtional channel m/z = 209 of CyTOF for single‐cell immunoassays. Bismuth has nearly the same charge‐to‐radius ratio as lanthanide elements; thus, bismuth(III) cations (209Bi3+) could coordinate with DTPA chelators in the same geometry of O‐ and N‐donor groups as that of lanthanide. In this report, the coordination chemistry of 209Bi3+ with DTPA chelators and Maxpar® X8 polymers were investigated in details. Accordingly, the protocols of conjugating antibody with bismuth mass tag were provided. A method based on UV‐Vis absorbance at 280 nm of 209Bi3+‐labeling DTPA complexes was developed to evaluate the stoichiometric ratio of 209Bi3+ cations to the conjugated antibody. Side‐by‐side single‐cell analysis experiments with bismuth‐ and lanthanide‐tagged antibodies were carried out to compare the analytical sensitivities. The measurement accuracy of bismuth‐tagged antibody was validated within in vitro assay using primary human natural killer cells. Furthermore, bismuth‐tagged antibodies were successfully employed in cell cycle measurements and high‐dimensional phenotyping immunoassays. © 2017 International Society for Advancement of Cytometry
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».