Delivery of Heme Oxygenase-1-Cell Penetrating Peptide (HO-1-CPP) Into Hepatocytes in In Vitro and Ex Vivo Model of Cold Ischemia.
Notice bibliographique
Résumé
In an attempt to increase the number of donor organs, one of the major strategies being employed by transplant surgeons is the use of extended criteria donor (ECD) organs. Unfortunately, ECD organs are more susceptible to cold ischemia. Several methods have been described that may reduce the cellular injury in experimental models of cold ischemia. One of the proteins that have gained a lot of traction is the heme-oxygenase-1 (HO-1). Induction of HO-1 expression under conditions of cellular stress has targeted it as a key gene for protection against injury during cold ischemic conditions. The aim of the present study is to introduce active and functional HO-1 protein conjugated to a cell penetrating peptide (CPP) directly in vitro to hepatocytes, and ex vivo to hepatocytes, endothelial cells, and Kupffer cells in hypothermic and anoxic conditions. This novel strategy may also be used for the ex vivo delivery of other protective proteins in hypothermic perfusion systems. Our preliminary experiments have determined that we are able to consistently produce a functional HO-1 protein fused to a CPP. To confirm the ability of our fusion protein to cross cell membranes, we have performed an in vitro experiment in which rodent (McA-RH7777) and human (Hep G2) hepatocytes were incubated with HO-1-CPP and later stained with anti-HO-1 and anti-His antibodies followed by fluorescent secondary antibodies. Localization of HO-1-CPP was revealed by (red) anti-His staining which shows a pattern consistent with HO-1 localization to the endoplasmic reticulum. Further evidence of the cell permeability of HO-1-CPP has been studied in ex vivo perfusion experiments. The HO-1-CPP perfused livers sections were paraffin embedded, sectioned and stained with an anti-HO-1 antibody which revealed intracellular localization of HO-1-CPP 4-5 cell layers deep surrounding the perfused vessel. Our ability to successfully deliver an active protein conjugated to a CPP to cells of a whole organ in an ex vivo hypothermic and hypoxic perfusion model holds great potential for future repair and protection of organs for transplantation. Future studies to determine the ability of HO-1-CPP to modulate the response to ischemia reperfusion injury (IRI) in our in vitro and ex vivo models are planned.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
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Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».