A178 ARGONAUTE 2 IS DISPENSABLE FOR EFFICIENT HEPATITIS C VIRUS REPLICATION IN HUH 7.5 CELLS.
Notice bibliographique
Résumé
A liver-specific microRNA, miR-122, protects the Hepatitis C virus (HCV) genome from degradation and promotes its replication. Therefore, the virus is deemed highly dependent on this miRNA. This makes it a very attractive therapeutic target that has shown promise in the clinical setting. Nevertheless, the underlying mechanism and the potential role of other host factors are still poorly understood. Argonaute (Ago) proteins are host multifunctional proteins that can be found at the heart of the RNA-Induced Silencing Complex. Humans express 4 Ago isoforms (Ago1-4) and Ago2, the only human Ago capable of endonucleolytic cleavage, has generally been viewed as the primary Ago involved in the HCV life cycle. This work aimed to investigate the specific role of Ago2 and to determine the impact of the other Ago isoforms in the HCV life cycle. To fulfill this objective we made use of the CRISPR/Cas9 technology to generate hepatoma-derived Ago2 knockout Huh7.5 cells. We have generated two cell lines with confirmed biallelic indel mutations in the Ago2 gene and both showed undetectable levels of Ago2 expression by Western blot. We also confirmed that the Ago2 knockout cells were devoid of knockdown activity by assaying for small interfering RNA (siRNA) directed cleavage activity. Somewhat unexpectedly, Ago2 knockout cells are able to support HCV replication, albeit to lower levels (50–70%) than the wild-type cells. Importantly, in the absence of Ago2, two siRNAs targeting miR-122 binding site 1 rescue HCV replication that had been inhibited by blocking the activity of miR-122. These results indicate that the other human Ago isoforms (Ago1, 3 and/or 4) are able to sustain HCV replication in the absence of Ago2, and that at least one, but potentially all, of the other Ago proteins can mediate miR-122 promotion of the HCV life cycle. Additionally, our data suggest that Ago2’s endonucleolytic cleavage activity is not required for miR-122 promotion of HCV replication. At present, we are generating cell lines in which combinations of all 4 Ago isoforms are knocked out in order to assess the roles of each Ago isoform in the HCV life cycle, and generate an Ago null cell line to be used for trans-complementation assays to investigate the mechanism by which Ago and miR-122 promote the HCV life cycle. These novel cell lines constitute valuable tools in the field of HCV research. They will allow the identification of other host factors for the design of multi-target therapeutic approaches, with potentially reduced long-term side effects and higher barriers to resistance compared to single target approaches. Saskatchewan Health Research Foundation and the Canadian Network on Hepatitis C
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».