Structural Studies of Multidrug Resistance Protein 1 Using “Almost” Cysless Template
Notice bibliographique
Résumé
Multidrug resistance protein, MRP1 (ABCC1) is a broad-spectrum ATP-binding cassette transporter that plays a major role in defense against dietary and environmental toxicants, in addition to contributing toward multidrug resistance of certain types of malignancy. Elucidating the molecular structure of hMRP1 is key to determining its mechanism of substrate recognition and transport. Here, we report the first successful attempt using cysteine-scanning mutagenesis coupled with cross-linking studies to probe the structure of hMRP1 in its native environment of the cell membrane or in membrane vesicles. We have established that an active 3Cys ΔMRP1 (MRP204–1531) mutant, described in previous studies from our laboratory, is a suitable template with which to generate single- and double-cysteine mutants for performing cysteine mutagenesis studies. We have now used 3Cys ΔMRP1 to probe the arrangement of several TM segments, as well as the location of individual amino acids in these regions. Cysteine residues were introduced into TMs 8, 14, 15, and 16 of 3Cys ΔMRP1. The mutants were then subjected to chemical cross-linking analyses, and cross-linking was detected between the following cysteine pairs: Cys388 (TM7) and I1193C (TM16); Cys388 (TM7) and E1144C (TM15); R433C (TM8) and E1144C (TM15); and R433C (TM8) and T1082C (TM14). The aqueous accessibility of these residues and the possible implications of the differences between the open and closed states of the protein are also discussed. Moreover, using competition experiments involving a well characterized substrate and a cross-linking reagent for probing the Cys388/ I1193C mutant, we have defined these amino acid positions as a component of the potential site for estrone sulfate binding.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».