Molecular Characterization of an SV Capture Site in the Mid-Region of the Presynaptic CaV2.1 Calcium Channel C-Terminal
Notice bibliographique
Résumé
Neurotransmitter is released from presynaptic nerve terminals at fast-transmitting synapses by the action potential-gating of voltage dependent calcium channels (CaV), primarily of the CaV2.1 and CaV2.2 types. Entering Ca2+ diffuses to a nearby calcium sensor associated with a docked synaptic vesicle (SV) and initiates its fusion and discharge. Our previous findings that single CaVs can gate SV fusion argued for one or more tethers linking CaVs to docked SVs, but the molecular nature of these tether have not been established. We recently developed a cell-free, in vitro biochemical assay, termed SV pull-down (SV-PD), to test for SV binding proteins and used this to demonstrate that CaV2.2 or the distal third of its C-terminal can capture SVs. In subsequent reports we identified the binding site and characterized an SV binding motif. In this study, we set out to test if a similar SV-binding mechanism exists in the primary presynaptic channel type, CaV2.1. We cloned the chick variant of this channel and to our surprise found that it lacked the terminal third of the C-terminal, ruling out direct correlation with CaV2.2. We used SV-PD to identify an SV binding site in the distal half of the CaV2.1 C-terminal, a region that corresponds to the central third of the CaV2.2 C-terminal. Mutant fusion proteins combined with motif-blocking peptide strategies identified two domains that could account for SV binding; one in an alternatively spliced region (E44) and a second more distal site. Our findings provide a molecular basis for CaV2.1 SV binding that can account for recent evidence of C-terminal-dependent transmitter release modulation and that may contribute to SV tethering within the CaV2.1 single channel Ca2+ domain.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».