High Resolution Fluorescence Imaging of Cell Membranes and Membrane Associated Interactions
Notice bibliographique
Résumé
Advanced methods of fluorescence microscopy with micrometre - nanometre resolution are described. Wide-field and laser scanning techniques are used to measure fluorescence markers in whole cells including intracellular membranes. In contrast, plasma membranes of living cells are assessed selectively by the evanescent electromagnetic field in Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy (TIRFM). TIRFM methods permit to measure cell-substrate topology as well as non-radiative intermolecular energy transfer (FRET) with nanometre resolution. Membrane dynamics – including membrane stiffness and fluidity – is assessed by spectral imaging and time-resolved fluorescence anisotropy measurements of the membrane marker 6-dodecanoyl-2-dimethylamino naphthalene (laurdan). Stiffness increases while fluidity decreases with increasing temperature as well as with an increasing intracellular amount of cholesterol. In addition, plasma membranes are always stiffer than intracellular membranes and retain their stiffness even after cholesterol depletion. This behavior may have some impact on the cellular uptake and release of pharmaceutical agents. Cell-substrate topology is measured by variable-angle TIRFM using fluorescent dyes with specific location either in the cytoplasm (e.g. calcein) or in the plasma membrane (e.g. laurdan). Due to its tumor-localizing and photosensitizing properties, measurements of protoporphyrin IX PP IX) in close proximity to the plasma membrane are of particular interest. It turned out that cell-substrate distances generally decreased, whereas focal adhesions were maintained upon light exposure. This implies that light-induced detachment of cells from their substrate was not likely to occur. Total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM) and non-radiative energy transfer (FRET) measurements have been combined in order to examine co-localization and possible interactions of various proteins, e.g. the amyloid precursor protein (APP) and the b-site APP-cleaving enzyme (BACE), which play some role in the pathogenesis of Alzheimer's disease. Both proteins were found in close proximity inside the cells and at some larger distance in the plasma membrane. A high amount of cholesterol was favourable for co-localization. The examples depicted above prove the potential of fluorescence microscopy with high spatial, temporal and spectral resolution.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».