Progress toward an amplifiable metabolic label for DNA: conversion of 4-thiothymidine (4sT) to 5-methyl-2′-deoxycytidine and synthesis of a 4sT phosphorodiamidate prodrug
Notice bibliographique
Résumé
The ability to metabolically label DNA in a way that produces a latent change from one nucleobase to another would create a signal that can be amplified by PCR — this in turn would allow studies of newly synthesized DNA using high-throughput sequencing. To function as an amplifiable metabolic label, a nucleotide analogue would need to be taken up by cells and incorporated into cellular DNA; after purification of DNA, it could be converted into a different nucleobase with a different base pairing pattern. We selected 4-thiothymidine (4sT) as a candidate metabolic label: 4sT is readily taken up by a large number of polymerases in vitro, and we present a method that allows 4sT to be converted into 5-methyl-2′-deoxycytidine (5mC) after incorporation into DNA. Encouraged by these results, we treated cells with 4sT nucleoside; however, we found that 4sT is not incorporated into DNA in bacterial, yeast, or mammalian cells to useful levels under the conditions we tested. A phosphorodiamidate prodrug of 4sTMP was successfully synthesized but did not measurably improve incorporation into cellular DNA.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».