Digital enzyme assay using attoliter droplet array
Notice bibliographique
Résumé
Single-molecule digital enzyme assay using micron-sized droplet array is a promising analysis method to quantify biomolecules at extremely low concentrations. However, multiplex digital enzyme assays are still difficult to access because the best buffer conditions can vary largely among enzymes. In addition, the best conditions for flurogenic compounds to retain high quantum efficiency and to avoid leakage into the oil phase can be also very different. In this study, digital enzyme assay was performed using an array of nanometer-sized droplets of 200 aL volume, termed 'nanocell'. Due to the small reaction volume, nanocell enhanced the accumulation rate of fluorescent products by a factor of 100 when compared with micron-sized reactors. Nanocell also enabled oil-free sealing of reactors: when flushed with an air flow, nanocell displayed water droplets under air, allowing enzymes to catalyze the reaction at the same rate as in oil-sealed reactors. Dual digital enzyme assay was also demonstrated using β-galactosidase and alkaline phosphatase (ALP) at pH 7.4, which is far from the optimum condition for ALP. Even under such a non-optimum condition, ALP molecules were successfully detected. Nanocell could largely expand the applicability of digital bioassay for enzymes under non-optimum conditions or enzymes of low turnover rate. The sealing of the reactor with air would also expand the applicability, allowing the use of fluorescent dyes that leak into oil.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».