A New Specific Promoter Allow Hematopoietic Stem Cell Immunotherapy Approach Against Acute Lymphoblastic Leukemia Using Chimeric Antigen Receptor
Notice bibliographique
Résumé
Although efficient, Chimeric Antigen Receptor (CAR)-T cells therapy still presents several drawbacks including exhaustion and loss of engineered cells, and the cytokine release syndrome. To circumvent these issues, we envisioned to engineer hematopoietic stem cells (HSCs) to provide a continuous replenishment of CAR-T and CAR-NK cells. However, this would result in a potentially dangerous pan-hematopoietic expression of the CAR transgene. To avoid this, we designed a T-cell specific and a NK-cell specific synthetic promoter in order to restrict the CAR expression only to the cytotoxic cells progeny issued from CAR-modified HSCs. We assessed the efficacy of our promoters in vitro and in vivo in humanized mice. Methods Potential sequences for T-cell or NK-cell specific expression were designed in silico and then cloned in a GFP-reporter vector to test their specificity. We assessed in vitro the expression of the reporter gene using cell lines from various lineages and primary cells isolated from peripheral blood. We then transduced CD34 + cell and humanized NSG mice engrafted with a human thymus. Results Upon transfection with GFP under the control of our synthetic promoter, only Jurkat (T cells) for our T-specific promoter and NK-92 (NK cells) for the NK-specific promoter, expressed GFP. Consistently, nucleofection of PBMC with the T-cell specific promoter resulted in a GFP expression in T cells but not in B cells or monocytes. The promoter specificity was validated in vivo as progeny from engineered human HSCs injected in NSG showed the same T-cell specific expression pattern (Fig. 1). Using an in vitro artificial organoid thymic differentiation system, we observed that our synthetic promoter was active as early as CD7 + C + D1 progenitor cells. We also showed that T cells transduced with our specific promoter retained CAR T-cell toxicity when facing their targets, despite a lower CAR expression than with classic strong promoter. Conclusion Our results show that we were able to generate new synthetic promoters with a lineage specificity. We are currently testing our strategy in vivo against human B-ALL cells lines and primary patients' blasts. We are also validating our new NK-specific promoter in vivo . This new strategy could help overcome side effects while improving CAR-T cells persistence, and could be used for both hematological malignancies and solid tumors after autologous transplantation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».