Development of a High Throughput Screen for the Identification of Inhibitors of Peptidoglycan O-Acetyltransferases, New Potential Antibacterial Targets
Notice bibliographique
Résumé
The O-acetylation of peptidoglycan occurs in many Gram-negative and most Gram-positive pathogens and this modification to the essential wall polymer controls the lytic activity of the autolysins, particularly the lytic transglycosylases, and inhibits that of the lysozymes of innate immunity systems. As such, the peptidoglycan O-acetyltransferases PatA/B and OatA are recognized as virulence factors. In this study, we present the high throughput screening of small compound libraries to identify the first known inhibitors of these enzymes. The fluorometric screening assay developed involved monitoring the respective O-acetyltransferases as esterases using 4-methylumbelliferylacetate as substrate. Pilot screens of 3921 compounds validated the usefulness of the HTS protocol. A number of potential inhibitors were identified amongst a total of 145,000 low molecular-weight compounds, some of which were common to both enzymes, while others were unique to each. After eliminating a number of false positives in secondary screens, dose response curves confirmed the apparent specificity of a benzothiazolyl-pyrazolo-pyridine as an inhibitor of Neisseria gonorrhoeae PatB, and several coumarin-based compounds as inhibitors of both this PatB and OatA from Staphylococcus aureus. The benzothiazolyl-pyrazolo-pyridine was determined to be a non-competitive inhibitor of PatB with a Ki of 126 µM. At 177 µg/mL and close to its solubility limit, this compound caused a 90% reduction in growth of N. gonorrhoeae, while growth of Escherichia coli, a bacterium that lacks PatB and, hence, does not produce O-acetylated peptidoglycan, was unaffected. These data provide preliminary proof of concept that peptidoglycan O-acetyltransferases would serve as useful antibacterial targets.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».