Analysis of phosphorylation of the myosin targeting subunit of smooth muscle myosin light chain phosphatase by Phos‐tag SDS‐PAGE
Notice bibliographique
Résumé
Phosphorylation of the myosin targeting subunit (MYPT1) of myosin light chain phosphatase plays an important role in the regulation of smooth muscle contraction, and several sites of phosphorylation by different protein Ser/Thr kinases have been identified. Furthermore, in some instances, phosphorylation at specific sites affects phosphorylation at neighboring sites, with functional consequences. Characterization of the complex phosphorylation of MYPT1 in tissue samples at rest and in response to contractile and relaxant stimuli is, therefore, challenging. We have exploited Phos‐tag SDS‐PAGE in combination with western blotting using antibodies to MYPT1 to separate multiple phosphorylated MYPT1 species and quantify MYPT1 phosphorylation stoichiometry using purified, full‐length recombinant MYPT1 phosphorylated by Rho‐associated coiled‐coil kinase (ROCK) and cyclic AMP‐dependent protein kinase (PKA). This approach confirmed that phosphorylation of MYPT1 by ROCK occurs at Thr697 and Thr855, PKA phosphorylates these two sites and the neighboring Ser696 and Ser854, and prior phosphorylation at Thr697 and Thr855 by ROCK precludes phosphorylation at Ser696 and Ser854 by PKA. Furthermore, phosphorylation at Thr697 and Thr855 by ROCK exposes two other sites of phosphorylation by PKA. Treatment of Triton‐skinned rat caudal arterial smooth muscle strips with the membrane‐impermeant phosphatase inhibitor microcystin, or of intact tissue with the membrane‐permeant calyculin A, induced slow, sustained contractions that correlated with phosphorylation of MYPT1 at 7 to ≥10 sites. Phos‐tag SDS‐PAGE thus provides a suitable and convenient method for analysis of the complex, multi‐site MYPT1 phosphorylation events involved in the regulation of myosin light chain phosphatase activity and smooth muscle contraction. Support or Funding Information Funded by the Canadian Institutes of Health Research (MOP‐111262)
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,003 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,003 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,003 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».