Characterization of influenza H1N1 Gag virus-like particles and extracellular vesicles co-produced in HEK-293SF
Notice bibliographique
Résumé
One of the concerns associated with the use of influenza virus-like particles (VLPs) as vaccine candidate or delivery system is their heterogeneous composition. Enveloped VLPs take up the host cell membrane at the budding site carrying out not only the viral antigenic proteins but also host proteins. In addition, the intrinsic nature of cells to produce membrane derived vesicles or extracellular vesicles (EVs), which have similar size to the VLPs, makes VLP purification process challenging. To further characterize these particles and identify proteins that are unique to each population, comparative proteomic analyses were completed to ultimately provide guidance for rational design of separation protocols. The VLPs were produced in suspension and serum free media by transient transfection of an inducible clone of a Human Embryonic Kidney (HEK-293SF) cells expressing HA and NA (H1N1/A/Puerto Rico/8/34), with a plasmid containing the gag gene of HIV-1 fused to GFP. EVs were produced independently from the non-transformed HEK-293SF cell line as a control for comparative studies. Both preparations were characterized for total nucleic acids and protein concentrations and extensively analyzed by nanoLC-MS/MS for their protein compositions. The proteomic analyses showed that aside from the recombinant VLP proteins, nucleolin was the most abundant host cell protein uniquely identified within VLPs (considering the MASCOT score value) while lactotransferrin and heat shock protein 90 were the most abundant proteins in EVs. Overall, this comparative study identifies potential target proteins as specific markers to guide VLP purification and discusses the biogenesis of enveloped particles released in HEK-293 cell suspension cultures emphasizing on the biological functions of host cell proteins identified.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».