PTEN (phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10) gain-of-function analysis in LNCaP prostate cancer cells
Notice bibliographique
Résumé
983 PTEN expression is frequently lost in advanced prostate cancer (PrCa). Mouse models with prostate specific loss of PTEN develop metastatic, androgen independent PrCa. However, ∼50% of lethal human PrCa continues to express PTEN indicating that prosurvival mechanisms are functional despite the presence of a major PI3K/Akt antagonist. In LNCaP PrCa cells, induction of apoptosis by PTEN is strongly opposed by androgens. However, androgen mediated genes that protect cells from PI3K/Akt antagonism are poorly understood. We have employed gain-of-function, stable LNCaP clones that inducibly express PTEN to assess: (1) alterations in PI3K/Akt signalling due to PTEN phosphatase activity and (2) the capacity for androgens to counteract an acute, PTEN mediated apoptotic response. Clones contained Tet-inducible expression constructs for PTEN WT or a catalytic mutant (C124S) and a VP16-Tet activator. LNCaP-PTEN and LNCaP-C124S cell stables were also made by lenti viral delivery of pLenti6/Tet repressor (TR) and a pDEST/TO/Lenti vector (Invitrogen). In charcoal-stripped serum (CSS) conditions, Doxycyclin (Dox; 2 ug/ml) efficiently induced WT PTEN and C124S PTEN expression, however, only WT PTEN effectively antagonized P-AktSer473/Thr308 and activated PARP cleavage. In CSS plus 1 nM R1881, WT PTEN diminished P-Akt, but did not activate PARP. Proliferation of LNCaP-WT PTEN cells cultured in CSS/Dox/1 nM R1881 for 7 days was 85% of growth in full serum conditions while growth of cells cultured in CSS/dox was 45% of control cultures. Soft agar assays confirmed that PTEN expressing LNCaP cells were tumourigenic in the presence of androgen. Nude mice harbouring subcutaneous LNCaP-PTEN/Matrigel xenografts with serum PSA levels of >50 ng/ml were administered Dox in drinking water ad libitum for 7 days. IHC analysis indicated PTEN expression in up to ∼70% of xenograft epithelium. Cells with high PTEN expression were also observed to have lower androgen receptor (AR) expression, suggesting an antagonistic interaction between androgens and PTEN. Gene expression was evaluated using an oligo microarray (14,000 spotted 70-mers) and Cy3 or Cy5 labelled cDNA generated from Dox treated (48 hours; 2 ug/ml) LNCaP-PTEN and LNCaP-C124S cells. Using GeneSpring 6.1 software our analysis considered: (1) the presence of serum; (2) the PTEN phosphatase function and (3) the presence of androgens. In addition to antagonizing PI3K, WT PTEN (but not C124S) induced apoptotic markers and decreased metabolic markers. Identification and characterization of genes associated with androgen mediated protection of PTEN expressing cells are presented and suggest how: (1) Stable, inducible integration has allowed evaluation of prolonged expression of PTEN expression in AR, PSA secreting PrCa cells and (2) how androgens prevent apoptosis and permit cell proliferation in the presence of PTEN for at least 7 days.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».