A253 RETINOIC ACID RECEPTOR ALPHA IS A NEGATIVE REGULATOR OF INTESTINAL EPITHELIAL TSLP GENE EXPRESSION
Notice bibliographique
Résumé
We have recently described decreased myeloid cell numbers in the large and small intestines of intestinal-specific Retinoic Acid Receptor (RAR) alpha-deficient mice (Villin-Cre RAR-/-mice). We therefore hypothesized that Retinoic Acid (RA) and its receptors may regulate the expression of intestinal Thymic Stromal Lymphopoietin (TSLP), an important cytokine involved in Th2-type immunity known to play critical roles in the maintenance of peripheral CD4+T cell homeostasis via the modulation of activation/maturation of myeloid cells and decreased IL-12 production. Importantly, TSLP levels are decreased in Crohn’s disease (CD) where inflammation is driven by IL-12. Furthermore, there is epidemiologic data suggesting that the RAR agonist all-trans retinoic acid (ATRA, Accutane©) may be protective in CD. To determine whether retinoic Acid is a positive regulator of TSLP expression via activation of RAR alpha in Intestinal Epithelial Cells (IECs). We examined TSLP expression in the colons of Villin-Cre RAR-/-mice. Epithelial cells were isolated from the crypts and surface colonic epithelium and RNA isolated and analyzed via qRT-PCR. TSLP expression in the surface colonic epithelium was compared to that of wild-type littermates. In order to determine whether changes in TSLP expression were due to cell intrinsic effects, we sought to generate a RARalpha IEC knockout cell line. Using CRISPR/CAS9 we targeted exon 5 in the open reading frame of the RARalpha gene in Mode-K murine IECs. Targeted cells were selected in puromycin, cloned and CRISPR cleavage confirmed using Surveyor assays. Knockdown of RARalpha was assessed using RARluciferase assays. TSLP expression in surface colonic epithelium was elevated 2.3 fold in RARalpha villin-cre mice compared to wild type litter mates. In contrast, crypt TSLP expression was unchanged, as expected given absence of Cre expression in this compartment. We successfully generated partial RARalpha deficient Mode-K cells based on the results of Surveyor assays and RAR-luciferase activity assays. TSLP expression was elevated 2.3 fold in the Mode-K RARalpha CRISPR clones versus parent Mode-K cells. TSLP expression is controlled at least in part by RAR alpha in colonic IECs where it may act as a repressor of TSLP promoter transactivation. This suggests that retinoic acid, a dietary factor, may influence myeloid and T cell function via effects on epithelial TSLP expression and suggests a mechanism whereby Accutane©(ATRA) may affect CD. CCCCumming School of Medicine
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».