Unraveling Determinants of Affinity Enhancement in Dimeric Aptamers for a Dimeric Protein
Notice bibliographique
Résumé
Abstract High-affinity aptamers can be derived de novo by using stringent conditions in SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment) experiments or can be engineered post SELEX via dimerization of selected aptamers. Using electrophoretic mobility shift assays, we studied a series of heterodimeric and homodimeric aptamers, constructed from two DNA aptamers with distinct primary sequences and secondary structures, previously isolated for VEGF-165, a homodimeric protein. We investigated four factors envisaged to impact the affinity of a dimeric aptamer to a dimeric protein: (1) length of the linker between two aptamer domains, (2) linking orientation, (3) binding-site compatibility of two component aptamers in a heterodimeric aptamer, and (4) steric acceptability of the two identical aptamers in a homodimeric aptamer. All heterodimeric aptamers for VEGF-165 were found to exhibit monomeric aptamer-like affinity and the lack of affinity enhancement was attributed to binding-site overlap by the constituent aptamers. The best homodimeric aptamer showed 2.8-fold better affinity than its monomeric unit ( K d = 13.6 ± 2.7 nM compared to 37.9 ± 14 nM), however the barrier to further affinity enhancement was ascribed to steric interference of the constituent aptamers. Our findings point to the need to consider the issues of binding-site compatibility and spatial requirement of aptamers for the development of dimeric aptamers capable of bivalent recognition. Thus, determinants highlighted herein should be assessed in future multimerization efforts.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».