Isolation of endothelial cells, pericytes and astrocytes from mouse brain
Notice bibliographique
Résumé
Primary cell isolation from the central nervous system (CNS) has allowed fundamental understanding of blood-brain barrier (BBB) properties. However, poorly described isolation techniques or suboptimal cellular purity has been a weak point of some published scientific articles. Here, we describe in detail how to isolate and enrich, using a common approach, endothelial cells (ECs) from adult mouse brains, as well as pericytes (PCs) and astrocytes (ACs) from newborn mouse brains. Our approach allowed the isolation of these three brain cell types with purities of around 90%. Furthermore, using our protocols, around 3 times more PCs and 2 times more ACs could be grown in culture, as compared to previously published protocols. The cells were identified and characterized using flow cytometry and confocal microscopy. The ability of ECs to form a tight monolayer was assessed for passages 0 to 3. The expression of claudin-5, occludin, zonula occludens-1, P-glycoprotein-1 and breast cancer resistance protein by ECs, as well as the ability of the cells to respond to cytokine stimuli (TNF-α, IFN-γ) was also investigated by q-PCR. The transcellular permeability of ECs was evaluated in the presence of pericytes or astrocytes in a Transwell® model by measuring the transendothelial electrical resistance (TEER), dextran-FITC and sodium fluorescein permeability. Overall, ECs at passages 0 and 1 featured the best properties valued in a BBB model. Furthermore, pericytes did not increase tightness of EC monolayers, whereas astrocytes did regardless of their seeding location. Finally, ECs resuspended in fetal bovine serum (FBS) and dimethyl sulfoxide (DMSO) could be cryopreserved in liquid nitrogen without affecting their phenotype nor their capacity to form a tight monolayer, thus allowing these primary cells to be used for various longitudinal in vitro studies of the blood-brain barrier.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».