Analysis of tricarboxylic acid cycle intermediates in dried blood spots by ultraperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
Notice bibliographique
Résumé
Background: We developed a novel method for measuring the concentrations of tricarboxylic acid (TCA) cycle intermediates in dried blood spots (DBS) using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/ MS). Analytes were derivatized before analysis using 4-[2-(N,N-dimethylamino) ethylaminosulfonyl]-7-(2-aminoethylamino)-2,1,3-benzoxa-diazole (DAABD-AE), a reagent that imparts powerful chromatographic and mass spectrometric properties onto carboxyl group-containing analytes. Methodology: Extraction and derivatization of TCA cycle intermediates were achieved in a single step by incubating a 3.2 mm circle of the DBS samples with DAABD-AE for 1 hour at 65 C. From the resultant mixture, 1.0 µl was injected into the LC-MS/MS. Results: Total analytical run time to separate target analytes from other interfering components in the sample was 8 minutes. The peaks corresponding to malic, fumaric, citric, succinic, and 2-ketoglutaric acid appeared at 3.55, 3.62, 3.64, 3.67, and 3.68 minutes, respectively. The method was adequately reproducible with a coefficient of variation for intraday (n = 15) and inter-day (n = 13) studies of 5.2%-18.4%. Reference intervals in DBS from controls (n = 125) were as follow (µmol/l): citric (36.6-126.4), 2-ketoglutaric (9.1-42.1), succinic (1.2-2.4), fumaric (2.4-9.0), and malic acid (15.9-39.3). Compared to controls, the levels of citric, succinic, and malic acids were statistically different in patients (n = 7) with a p-value of< 0.05. No statistically significant difference was detected in concentrations of 2-ketoglutaric and fumaric acids. Conclusion: We describe a simple, quick, and sensitive method to measure TCA cycle intermediates in DBS samples. That TCA cycle plays a central role in cellular metabolism; this method should be useful in studying these metabolites in health and disease.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».