A192 DEPLETING ASCL2 IN ESOPHAGEAL ORGANOIDS TO INVESTIGATE ITS ROLE IN STEM CELLS MAINTENANCE
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background Recently, the first population of stem cells in the esophageal epithelium was identified with the help of the Keratin 15(Krt15) marker. However, little is known about the mechanisms underlying the expansion and the function of stem cells in the esophagus. It was shown that ASCL2, a transcription factor, is upregulated in Krt15+cells compared with Krt15- cells. ASCL2 is a gene target of the Wnt/β-catenin pathway, which act as a regulator of proliferation and maintenance of the stemness state. The ultimate goal of my research project is to determine the role of ASCL2 in the maintenance of esophageal stem cells and to identify his binding partners. Aims To investigate the role of ASCL2 in esophageal epithelial biology, we aim at establishingAscl2knockout esophageal organoid lines. Methods Lentiviral infection and CRISPR/Cas9 knockout approach were optimized in mouse esophageal organoids. ASCL2was invalidated with CRISPR/Cas9 and/or inducible specific shRNAs in primary mouse esophageal cell line and organoids. Antibodies directed against ASCL2 were also tested to validate cell lines. Results First, to optimize lentiviral infection in mouse esophageal organoids, we produced GFP-expressing lentiviruses. Viruses were then concentrated and incubated with a single cell suspension of mouse organoid cells under gentle activation. Infected cells were embedded in Matrigel and grown in organoids. GFP+ cells were then selected using an antibiotic resistance strategy. Second, we used our optimized lentiviral infection protocol to express specific gRNAs in mouse esophageal organoids, which were previously screened in a primary mouse esophageal cell line. Knockout were validated using Western Blot. Invalidation of ASCL2 was performed using CRISPR/Cas9 and inducible shRNAs. We also validated three commercially available ASCL2 antibodies in WB and IF. Conclusions ASCL2 is expressed in the mouse esophagus tissue and organoids, and it can be invalidated in cell lines and organoids. Funding Agencies NSERC, CRC Tier2
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».