Characterization of a CFTR construct with a C‐terminal tetracysteine sequence and its use in the visualization of trafficking pathways
Notice bibliographique
Résumé
Membrane permeable bi‐arsenical dyes, such as fluorescein arsenical hairpin (FlAsH), bind tetracysteine‐tagged‐proteins emitting fluorescence in‐vivo . This fluorescence method (developed by R. Tsien) provides a tool to evaluate trafficking pathways in living cells. We generated a tetracysteine‐tagged Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator (CFTR) protein and studied its expression with the long‐term goal of using this protein to study its trafficking during endocytosis. The tetracysteine‐tagged CFTR (CFTR‐TC) was predominantly expressed in both BHK and in Cos‐7 cells as the immature core‐glycosylated form (band B) rather than the mature glycosylated band C. Iodide efflux assays of CFTR‐TC's function as a chloride channel at the cell surface revealed an insignificant response after cAMP stimulation, likely reflecting its low band C expression. Interestingly, 1 hour FlAsH pre‐treatment evoked a mean response difference of −16.0 mV versus untreated (one‐way ANOVA p<0.05), suggesting increased band C expression. Our results suggest that FlAsH rescues the surface expression of CFTR‐TC and studies are ongoing to visualize its localization and the regulation of its trafficking by proteins involved in the endocytic pathway. The work is supported by the Natural Sciences and Engineering Research Council (postgraduate scholarship) and the Canadian Cystic Fibrosis Foundation BREATHE Program.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».