Characterization of pH3DZ1 — An RNA-cleaving deoxyribozyme with optimal activity at pH 3
Notice bibliographique
Résumé
We previously described a cis-acting RNA-cleaving deoxyribozyme known as pH3DZ1 that exhibits optimal catalytic activity at pH 3.0 (Zhongjie Liu, Shirley H. Mei, John D. Brennan, and Yingfu Li. J. Am. Chem. Soc. 125, 7539 (2003)). This DNA catalyst was made of a 99-nucleotide (nt) catalytic domain covalently linked to a 23-nt DNA–RNA chimeric substrate containing a single ribonucleotide as the cleavage site. In the present work, we conducted an extensive sequence examination of this deoxyribozyme via nucleotide truncation and reselection experiments, with a goal to minimize its size and identify the nucleotides that are crucial to its catalytic function. A trans-acting deoxyribozyme that can process an external substrate was also successfully designed. Stretches of 30 and 17 nucleotides from the 5′ and 3′ ends of the trans catalyst, respectively, were found to be completely dispensable; in contrast, few nucleotides could be deleted internally without producing a detrimental effect. The reselection experiment led to the discovery of 7 and 5 absolutely conserved nucleotides located at the 5′ and 3′ ends of the minimized catalyst, respectively, separated by a 31-nt element in which 14 highly conserved nucleotides were scattered among 17 variable nucleotides. The shortened deoxyribozyme and the original catalyst showed a similar pH profile with the optimal activity at pH 3; however, the minimized deoxyribozyme still exhibited strong catalytic activity at pH 2.5, while the full-length catalyst was barely active at this pH. Finally, it was found that this deoxyribozyme generated two cleavage fragments, one with 2′,3′-cyclic phosphate and the other with 5′-OH.Key words: DNA, deoxyribozyme, RNA cleavage, in vitro selection, catalysis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».