A baculoviral system for the production of human β-glucocerebrosidase enables atomic resolution analysis
Notice bibliographique
Résumé
) catalyses the hydrolysis of glycosphingolipids. Inherited deficiencies in GBA cause the lysosomal storage disorder Gaucher disease (GD). Consequently, GBA is of considerable medical interest, with continuous advances in the development of inhibitors, chaperones and activity-based probes. The development of new GBA inhibitors requires a source of active protein; however, the majority of structural and mechanistic studies of GBA today rely on clinical enzyme-replacement therapy (ERT) formulations, which are incredibly costly and are often difficult to obtain in adequate supply. Here, the production of active crystallizable GBA in insect cells using a baculovirus expression system is reported, providing a nonclinical source of recombinant GBA with comparable activity and biophysical properties to ERT preparations. Furthermore, a novel crystal form of GBA is described which diffracts to give a 0.98 Å resolution unliganded structure. A structure in complex with the inactivator 2,4-dinitrophenyl-2-deoxy-2-fluoro-β-D-glucopyranoside was also obtained, demonstrating the ability of this GBA formulation to be used in ligand-binding studies. In light of its purity, stability and activity, the GBA production protocol described here should circumvent the need for ERT formulations for structural and biochemical studies and serve to support GD research.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».