Designing and Validating a New Method the TUNEL Microwave (TUNEL-MW) for Rapid Quantification of Apoptosis in Islets Following Isolation and Post-Thaw
Notice bibliographique
Résumé
Background: Among the current quality control assays used in islet transplantation, there is an urgent need for more appropriate assays that measure cell damage via apoptosis that are accurate and rapid. Although the Terminal Uridine Nucleotide End Labeling (TUNEL) is a popular marker for apoptosis, the protocol takes 4 hours to complete. In this regard, microwave assisted histoprocessing, which shortens the time taken for processing, holds promise. Keeping this in mind, a new TUNEL Microwave (TUNEL-MW) method, for rapid quantification of apoptosis, was designed, developed and validated. Method: Two lots of post-thaw isolated human islets cultured for 24 hours, 3 days, 5 days and 7 days i.e. 8 samples, were used for the study. Dewaxed and rehydrated tissues were processed for routine histology, stained with haematoxylin and eosin (H&E) and the conventional TUNEL was carried out as per manufacturer’s instructions. For the TUNEL-MW, kit instructions were modified and microwave-assisted histoprocessing was done. The assessment of apoptotic index (AI%) by light microscopy (LM) was carried out by a pathologist who was completely blinded to the study. Results: The new TUNEL-Microwave (TUNEL-MW) developed by us reduced processing time from 4 hours to 30 minutes (saving 3½ hours). Results were validated by univariate linear regression (r2>0.990), coefficient of variation (<5% between all three methods) and the Bland Altman plot comparing AI% determined by the new TUNEL-MW with the conventional TUNEL and with LM (gold standard). Conclusion: TUNEL Microwave appears to be an ideal method. It is simple and takes just 30 minutes to perform and can therefore be used along with existing quality control measures to rule out or measure apoptosis prior to islet release for islet transplantation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,014 | 0,008 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,002 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».