Stoichiometry of Rtt109 complexes with Vps75 and histones H3-H4
Notice bibliographique
Résumé
Histone acetylation is one of many posttranslational modifications that affect nucleosome accessibility. Vps75 is a histone chaperone that stimulates Rtt109 acetyltransferase activity toward histones H3-H4 in yeast. In this study, we use sedimentation velocity and light scattering to characterize various Vps75-Rtt109 complexes, both with and without H3-H4. These complexes were previously ill-defined because of protein multivalency and oligomerization. We determine both relative and absolute stoichiometry and define the most pertinent and homogeneous complexes. We show that the Vps75 dimer contains two unequal binding sites for Rtt109, with the weaker binding site being dispensable for H3-H4 acetylation. We further show that the Vps75-Rtt109-(H3-H4) complex is in equilibrium between a 2:1:1 species and a 4:2:2 species. Using a dimerization mutant of H3, we show that this equilibrium is mediated by the four-helix bundle between the two copies of H3. We optimize the purity, yield, and homogeneity of Vps75-Rtt109 complexes and determine optimal conditions for solubility when H3-H4 is added. Our comprehensive biochemical and biophysical approach ultimately defines the large-scale preparation of Vps75-Rtt109-(H3-H4) complexes with precise stoichiometry. This is an essential prerequisite for ongoing high-resolution structural and functional analysis of this important multi-subunit complex.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».