Comparative expression of potato proteinase inhibitor type II in an oxidative versus reductive cytosolic environment of Escherichia coli
Notice bibliographique
Résumé
Potato proteinase inhibitor type II (PI2) is an enzyme primarily expressed in potato tubers that suppresses the activity of serine proteases such as trypsin and chymotrypsin. PI2 is a disulfide-rich protein that requires an oxidative cytosolic redox state to allow for proper folding in Escherichia coli. In this paper, three different strains of E. coli, BL21 (DE3), SHuffle and Origami 2, were selected for their distinct cytosolic environments. BL21 (DE3) has a reducing cytosolic environment that is not conducive for disulfide bond formation, whereas Origami 2 and SHuffle have oxidative cytosolic environments that promote disulfide bond formation. The objective of this research project was to express and purify PI2 in the three strains of E. coli to compare protein folding of the purified product. Previously, PI2 was cloned into a vector containing a fusion of a maltose-binding protein tag to increase the solubility and to facilitate the purification through amylose affinity chromatography. In the present study, this vector was transformed into the three E. coli strains and the expression of PI2 was induced. PI2 was subsequently purified on an amylose column and the folded state of the purified protein was probed through a limited proteolysis assay. Results indicate that PI2 was expressed in BL21 and SHuffle, but not in Origami 2. However, purified MBP-PI2 protein was only obtained from SHuffle. Limited proteolysis of the purified protein showed that the PI2 purified from SHuffle may have been in the folded state. Therefore, this study demonstrates that PI2 can potentially be expressed in a native conformation in SHuffle.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».