Linear and Gaussian Analysis of a Single Enzyme Molecule by LC–MS
Notice bibliographique
Résumé
Abstract The alkaline phosphatase–streptavidin enzyme amplification conjugate (APSA) was diluted and quantified to the equivalent of one enzyme molecule injected on column by monitoring the production of excess adenosine from adenosine monophosphate (AMP) using sensitive and selective enzyme-linked mass spectrometric assay. The APSA enzyme conjugate has a mass of about 195 kDa and catalyzed the production of millions of enzyme products over the course of incubation that may be sensitively quantified by liquid chromatography, electrospray ionization, and mass spectrometry. APSA enzyme conjugate from fg/mL to ag/mL alongside 0 g/mL (control) was incubated with the substrate 1 mM AMP for 2 h in free solution before collecting a 1 μL of sample of the enzyme product adenosine for injection and analysis by LC–MS. The enzyme product adenosine showed a Gaussian distribution after log10 transformation. The safe limit of detection and quantification was approximately 250 zg of APSA enzyme conjugate injected on column. A linear signal with acceptable error was observed at the mass of the enzyme product adenosine from 10 to 10000 zg of APSA enzyme conjugate injected, compared to controls without enzyme. It was possible to make a linear and Gaussian measurement to the single molecule range of the universal APSA enzyme amplification conjugate per micro liter injected with approximately 10% error. This study describes the first linear and Gaussian quantification of enzyme product from the equivalent of one enzyme conjugate molecule injected onto LC–MS for analysis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,007 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,002 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,003 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,003 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».