Cardiac RyR N-terminal region biosensors for FRET-based high-throughput screening
Notice bibliographique
Résumé
Abstract The N-terminal region (NTR) of the ryanodine receptor (RyR) calcium channels is critical to the regulation of Ca 2+ release during excitation-contraction coupling. NTR hosts numerous mutations linked to skeletal and cardiac myopathies (RyR1 and RyR2, respectively), highlighting its potential as therapeutic target. Here, we labeled the NTR of mouse RyR2 at subdomains A, B, and C with donor and acceptor pairs for fluorescence resonance energy transfer (FRET), obtaining two biosensors. Using fluorescence lifetime (FLT)-detection of intramolecular FRET, we developed high-throughput screening (HTS) assays with the biosensors to identify small-molecule modulators of RyR. We screened a 1280-compound validation library and identified several hits. Hits with saturable FRET dose-response profiles, and previously unreported effects on RyR activity, were further tested using [ 3 H]ryanodine binding to isolated sarcoplasmic reticulum vesicles, to measure their effects on full-length RyR opening in its natural membrane environment. We identified three novel inhibitors of both RyR1 and RyR2, and two RyR1-selective inhibitors at nanomolar Ca 2+ . These compounds may function as inhibitors of leaky RyRs in muscle. Two of these hits activated RyR1 only at micromolar Ca 2+ , highlighting them as potential activators of excitation-contraction coupling. These results indicate that large-scale HTS using this platform can lead to compounds with potential for therapeutic development.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,002 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».