Optimization and validation of a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for detection of Giardia duodenalis in leafy greens
Notice bibliographique
Résumé
Giardia duodenalis is one of the most common food and water-borne intestinal parasites of humans and animals worldwide. Fresh, ready-to-eat produce such as leafy greens and salad mixes are considered potential transmission vehicles for Giardia infection in humans. Therefore, a specific, sensitive, and reliable method for Giardia detection in leafy greens is needed. We optimized washing procedures for the recovery of Giardia cysts from leafy greens and adapted and validated an existing EF1α LAMP assay for the detection of Giardia DNA to support routine diagnostic surveillance and disease outbreak investigations. Four leafy green types (35 ± 1 g) were spiked with 100 Giardia cysts and we compared washing by shaking with 1 M glycine (n = 20) or 0.1% Alconox (n = 20). DNA was extracted from washes, tested by LAMP and melt curve analysis, and time to positive (TTP) values compared. The detection limit was determined by spiking 10 (n = 40) Giardia cysts onto these same types of leafy greens and processing as above with 0.1% Alconox. Method robustness was assessed by subjecting spring mix (n = 45 total) to aging (1, 3 or 7 days) and washes to aging and freezing conditions prior to testing. Assay repeatability and specificity were evaluated, and an artificial positive control (APC) distinguishable by melt temperature (Tm) from DNA of Giardia spiked on leafy greens was designed to rule out cross-contamination from the control. Giardia detection rates were higher and TTP was lower (P < 0.05) for 0.1% Alconox (19/20, 8.85 ± 0.3 min) compared with 1 M glycine (15/20, 14.53 ± 7.2 min). The LAMP assay detected 10 Giardia cysts spiked on leafy greens in 13–34 min in 14/40 samples tested. Robustness assessment showed that TTP was higher (P < 0.0001) when spiked produce was stored for 7 days (13.09 ± 1.14 min) compared to fresh (9.72 ± 0.43 min). No unspiked samples were positive by LAMP, and the Tm for DNA of Giardia spiked on leafy greens was higher (P < 0.0001, 87.43 ± 0.05 °C) than the APC (86.43 ± 0.12 °C). Within-assay repeatability co-efficient of variation (CV) for TTP was 5.4% and no cross-contamination occurred when spiked and un-spiked samples were processed in alternate order. The optimized sample processing procedure combined with the EF1α LAMP assay is a sensitive, specific, labour-saving, and rapid method for the detection of Giardia cysts in leafy greens.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,003 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».