Abstract A04: Biophysical and biochemical characterization of Src-phosphorylated KRas
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Tyrosine phosphorylation of several small GTPase proteins including Ras has been reported; however, investigations to understand the biologic role of tyrosine phosphorylated small GTPases have been limited. We will present the detailed characterization of the impact of tyrosyl phosphorylation of KRas on each stage of the GTPase cycle, and on the binding to the RBD of BRaf. Using NMR and MS analysis we demonstrate that a catalytic amount of Src (1 mole of Src into 250 moles of KRas) specifically phosphorylates KRas at two of the eight tyrosine residues (Y32 and Y64) in vitro. In HEK293 cells, ectopic expression of Src with KRas results in tyrosyl phosphorylation of the same sites in KRas. Tyrosyl phosphorylation of KRas perturbs the chemical shifts of residues in the two switch regions. Using our real-time NMR-based small GTPase assay, we illustrate that tyrosyl phosphorylation alters regulation of the KRas GTPase cycle by guanine exchange factor (SOScat) and GTPase activating protein (p120GAP), rendering KRas resistant to both activities. Furthermore, using an Octet BLI binding assay, we demonstrated that tyrosyl phosphorylation of KRas strongly impairs BRaf-RBD binding. In vitro, Src-phosphorylated KRas can be completely dephosphorylated by the phosphatase SHP2. In cells, we were able to detect endogenous tyrosyl phosphorylated Ras upon SHP2 CRISPR knockout. Together, our findings demonstrate that the GTPase cycle and effector binding affinity of KRas can be regulated by the balance of Src and SHP2 activities. Citation Format: Teklab Gebregiworgis, Christopher B. Marshall, Yoshihito Kano, Michael Ohh, Mitsuhiko Ikura. Biophysical and biochemical characterization of Src-phosphorylated KRas [abstract]. In: Proceedings of the AACR Special Conference on Targeting RAS-Driven Cancers; 2018 Dec 9-12; San Diego, CA. Philadelphia (PA): AACR; Mol Cancer Res 2020;18(5_Suppl):Abstract nr A04.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
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