A VHH-Fc Fusion Targeted to the Chloroplast Thylakoid Lumen Assembles and Neutralizes Enterohemorrhagic E. coli O157:H7
Notice bibliographique
Résumé
Chimeric fusion proteins comprising a single domain antibody (V H H) fused to a crystallizable fragment (Fc) of an immunoglobulin are modular glycoproteins that are becoming increasingly in demand because of their value as diagnostics, research reagents and passive immunization therapeutics. Because ER-associated degradation and misfolding may potentially be limiting factors in the oxidative folding of V H H-Fc fusion proteins in the ER, we sought to explore oxidative folding in an alternative sub-compartment, the chloroplast thylakoid lumen, and determine its viability in a molecular farming context. We developed a set of in-house expression vectors for transient transformation of Nicotiana benthamiana leaves that target a V H H-Fc to the thylakoid lumen via either secretory (Sec) or twin-arginine translocation (Tat) import pathways. Compared to stromal [6.63 ± 3.41 mg/kg fresh weight (FW)], cytoplasmic (undetectable) and Tat-import pathways (5.43 ± 2.41 mg/kg FW), the Sec-targeted V H H-Fc showed superior accumulation (30.56 ± 5.19 mg/kg FW), but was less than that of the ER (51.16 ± 9.11 mg/kg FW). Additionally, the introduction of a rationally designed de novo disulfide bond enhances in planta accumulation when introduced into the Sec-targeted Fc fusion protein from 50.24 ± 4.08 mg/kg FW to 110.90 ± 6.46 mg/kg FW. In vitro immunofluorescent labeling assays on V H H-Fc purified from Sec, Tat, and stromal pathways demonstrate that the antibody still retains V H H functionality in binding Escherichia coli O157:H7 and neutralizing its intimate adherence to human epithelial type 2 cells. These results overall provide a proof of concept that the oxidative folding environment of the thylakoid lumen may be a viable compartment for stably folding disulfide-containing recombinant V H H-Fc proteins.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».