Optimization of operation conditions for improved cytochrome <scp>P450BM3</scp> enzymatic reaction yield
Notice bibliographique
Résumé
Abstract The P450 cytochrome monooxygenase CYP102A1 from Bacillus megaterium , better known as P450BM3, is a heme‐thiolate enzyme that catalyzes the hydroxylation of numerous substrates. Many of the resulting products are of commercial interest to the pharmaceutical and fine chemical industries. Unlike most other P450 cytochromes, P450BM3 is both soluble and fused to its natural redox partner, which supplies the necessary electrons from NADPH to drive its reaction forward. However, the industrial use of this enzyme is limited by its poor stability and its expensive cofactor. In this work, we explore the effects of buffer formulation and temperature on the stability of wildtype and P450BM3 mutant R966D/W1046S as well as on the stability of nicotinamide cofactors NADPH, NADH, and the biomimetic cofactor N‐benzyl‐1,4‐dihydronicotinamide. We demonstrate that cofactor stability is more important to increase product yield than that of the enzyme. We also demonstrate that low temperatures enhance oxido‐reduction reactions coupling, thus resulting in an increase in the molar ratio of p‐ nitrophenolate produced from 10‐ p NCA per oxidized cofactor. Overall, the optimized reaction conditions lead to a 2 to 2.6‐fold increase in total product output when wildtype P450BM3 or R966D/W1046S mutant is used with either of these three aforementioned cofactors.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».