Confocal Endomicroscopy of Neuromuscular Junctions Stained with Physiologically Inert Protein Fragments of Tetanus Toxin
Notice bibliographique
Résumé
Live imaging of neuromuscular junctions (NMJs) in situ has been constrained by the suitability of ligands for inert vital staining of motor nerve terminals. Here, we constructed several truncated derivatives of the tetanus toxin C-fragment (TetC) fused with Emerald Fluorescent Protein (emGFP). Four constructs, namely full length emGFP-TetC (emGFP-865:TetC) or truncations comprising amino acids 1066–1315 (emGFP-1066:TetC), 1093–1315 (emGFP-1093:TetC) and 1109–1315 (emGFP-1109:TetC), produced selective, high-contrast staining of motor nerve terminals in rodent or human muscle explants. Isometric tension and intracellular recordings of endplate potentials from mouse muscles indicated that neither full-length nor truncated emGFP-TetC constructs significantly impaired NMJ function or transmission. Motor nerve terminals stained with emGFP-TetC constructs were readily visualised in situ or in isolated preparations using fibre-optic confocal endomicroscopy (CEM). emGFP-TetC derivatives and CEM also visualised regenerated NMJs. Dual-waveband CEM imaging of preparations co-stained with fluorescent emGFP-TetC constructs and Alexa647-α-bungarotoxin resolved innervated from denervated NMJs in axotomized WldS mouse muscle and degenerating NMJs in transgenic SOD1G93A mouse muscle. Our findings highlight the region of the TetC fragment required for selective binding and visualisation of motor nerve terminals and show that fluorescent derivatives of TetC are suitable for in situ morphological and physiological characterisation of healthy, injured and diseased NMJs.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».