Detection and quantification of the vacuolar H+ATPase using the <i>Legionella</i> effector protein SidK
Notice bibliographique
Résumé
Acidification of secretory and endocytic organelles is required for proper receptor recycling, membrane traffic, protein degradation, and solute transport. Proton-pumping vacuolar H+ ATPases (V-ATPases) are responsible for this luminal acidification, which increases progressively as secretory and endocytic vesicles mature. An increasing density of V-ATPase complexes is thought to account for the gradual decrease in pH, but available reagents have not been sufficiently sensitive or specific to test this hypothesis. We introduce a new probe to localize and quantify V-ATPases. The probe is derived from SidK, a Legionella pneumophila effector protein that binds to the V-ATPase A subunit. We generated plasmids encoding fluorescent chimeras of SidK1-278, and labeled recombinant SidK1-278 with Alexa Fluor 568 to visualize and quantify V-ATPases with high specificity in live and fixed cells, respectively. We show that V-ATPases are acquired progressively during phagosome maturation, that they distribute in discrete membrane subdomains, and that their density in lysosomes depends on their subcellular localization.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».