P3‐226: <i>In vitro</i> cellular uptake of a magnetic resonance imaging (MRI)/fluorescent contrast agent for detection of Cathepsin‐D activity in Alzheimer's disease
Notice bibliographique
Résumé
There are currently no clinically useful biomarkers for the early diagnosis of Alzheimer's disease (AD). Cathepsin D (CatD) is a lysosomal protease present at elevated levels in amyloid plaques and neuronal cells of AD patients. We have synthesized a magnetic resonance imaging (MRI)/fluorescent contrast agent, DOTA-CAT, to detect CatD. DOTA-CAT consists of a DOTA-caged metal ion, coupled to a cell-penetrating peptide sequence and a CatD recognition site. A fluorescent probe, Oregon Green, was also attached to DOTA-CAT to monitor its uptake optically. The purpose of this study was to establish the cellular uptake of this MRI/fluorescent contrast agent targeting CatD. SN56 cells, a neuronal cell line, were cultured and differentiated. To simulate conditions of increased CatD, cells were transfected with a plasmid which stimulates high level expression of human CatD tagged with red fluorescent protein. Varying concentrations (5, 10, 50, 100 μM) of DOTA-CAT were added to the media of SN56 cells and confocal microscopy was performed at 30 minutes. Uptake was quantified by counting the proportion of cells which were labeled with DOTA-CAT expressed as Mean ± SEM. Lastly, cleavage experiments on DOTA-CAT were performed using purified CatD and analyzed using electrospray-ionization mass spectrometry (ESI-MS). In uptake experiments, 19 ± 2% of cells exposed to the agent at 5 μM took up DOTA-CAT, and this number increased with concentration such that at 100 μM, 78 ± 7% of cells took up DOTA-CAT. In contrast, a maximum of 5 ± 1% of cells not over-expressing CatD took up DOTA-CAT over the entire concentration range. DOTA-CAT was observed intracellularly and in intracellular vesicles frequently co-localized with red fluorescent protein tagged-CatD within lysosomes. In cleavage experiments, incubation of DOTA-CAT with CatD produced a 1906.6 Da fragment confirming the cleavage of DOTA-CAT at the predicted CatD recognition sequence. These experiments demonstrate that DOTA-CAT interacts with CatD and is cleaved as predicted. Furthermore, DOTA-CAT is preferentially taken up by SN56 cells over-expressing CatD in a concentration dependant manner. Therefore, DOTA-CAT shows significant potential as a molecular imaging probe that will be further evaluated in future experiments using an in-vivo model of AD.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».