Elongation arrest blocking primers enhance parasite detection in 18S rRNA metabarcoding study of Mesonauta festivus gut eukaryotic communities.
Notice bibliographique
Résumé
The study of the eukaryotic fraction of the microbiota using a metabarcoding approach is usually hindered by the high host to eukaryotic microbiota DNA ratio in samples. Indeed, the 18S rRNA gene is very similar for both the host and its eukaryotic communities, leading to a preferential amplification of the predominant host DNA when using universal primers. Multiple approaches have been developed to reduce host DNA amplification. One method is based on elongation arrest blocking primers, oligonucleotides modified with a C3 Spacer that stops the advancement of the DNA polymerase at non-conserved regions of a target gene. In this paper, we successfully developed and tested species-specific elongation arrest blocking primers to block the Flag cichlid, Mesonauta festivus, 18S rRNA SSU. Our elongation arrest blocking primers significantly reduced the amount of host DNA amplicons by 66 %. In addition to reducing the amount of sequencing wasted, the blocking primers increased the detectability of potentially dangerous parasitic taxa in fish gut, highlighting the potential of the method for parasitic screening. For instance, we discovered a case of infection by the parasitic ciliate Nyctotherus sp. and detected the presence of a parasitic Trematode and an Amoebae. While our data support the possibility of achieving a complete inhibition of host DNA amplification using elongation arrest blocking primers, more research is still required. Still, there is a need for the development and additional testing of protocols to study the eukaryotic diversity present in fish gut, a slow-growing field of study in comparison to its prokaryotic counterpart.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».