The MyLO CRISPR-Cas9 toolkit: a markerless yeast localization and overexpression CRISPR-Cas9 toolkit
Notice bibliographique
Résumé
The genetic tractability of the yeast Saccharomyces cerevisiae has made it a key model organism for basic research and a target for metabolic engineering. To streamline the introduction of tagged genes and compartmental markers with powerful Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) - CRISPR-associated protein 9 (Cas9)-based genome editing tools, we constructed a Markerless Yeast Localization and Overexpression (MyLO) CRISPR-Cas9 toolkit with 3 components: (1) a set of optimized Streptococcus pyogenes Cas9-guide RNA expression vectors with 5 selectable markers and the option to either preclone or cotransform the gRNAs; (2) vectors for the one-step construction of integration cassettes expressing an untagged or green fluorescent protein/red fluorescent protein/hemagglutinin-tagged gene of interest at one of 3 levels, supporting localization and overexpression studies; and (3) integration cassettes containing moderately expressed green fluorescent protein- or red fluorescent protein-tagged compartmental markers for colocalization experiments. These components allow rapid, high-efficiency genomic integrations and modifications with only transient selection for the Cas9 vector, resulting in markerless transformations. To demonstrate the ease of use, we applied our complete set of compartmental markers to colabel all target subcellular compartments with green fluorescent protein and red fluorescent protein. Thus, the MyLO toolkit packages CRISPR-Cas9 technology into a flexible, optimized bundle that allows the stable genomic integration of DNA with the ease of use approaching that of transforming plasmids.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».