Modulating Myogenesis: An Optimized <i>In Vitro</i> Assay to Pharmacologically Influence Primary Myoblast Differentiation
Notice bibliographique
Résumé
The intentional pharmacological manipulation of myogenesis is an important technique for understanding the underlying mechanisms of muscle differentiation and disease etiology. Using the pharmacological agent metformin as an example molecule, we present a systematic approach to examine the impact of pharmacological agents on the myogenic program. This consists of optimizing the in vitro differentiation of primary myoblast cells followed by the generation of a dose-response curve for a respective pharmaceutical. To assess myogenic differentiation, we utilized three approaches (incorporating both transcriptional and protein techniques) to assess the effects of biologically active agents on the in vitro differentiation of primary myogenic progenitors. First, the immunofluorescent visualization of myosin heavy chain (MYHC), which is expressed in differentiated myofibers, is used to obtain the fusion index, a quantitative read-out of differentiation efficiency. Second, quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR) reveals the expression of myogenic factors (Pax7, Myf5, Myod, Myog, Myh2) at the transcript level. Third, western blotting is used to assess the protein expression levels of the myogenic markers (PAX7, MYF5, MYOD, MYOG, and MYHC). By monitoring the expression of these various myogenic factors during the differentiation process, the relative cellular state and differentiation status between samples can be determined. Combined, these approaches enable the successful assessment of the impact of pharmacological agents on myogenic differentiation. © 2022 The Authors. Current Protocols published by Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol: Immunofluorescence assay for qualitative and quantitative assessment of pharmacological agents on in vitro myogenic differentiation Support Protocol 1: Evaluating myogenic gene expression by RT-qPCR Support Protocol 2: Evaluating myogenic protein expression by western blot.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».