Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9-generated diallelic mutants reveal Arabidopsis actin-related protein 2 function in the trafficking of syntaxin PEN1
Notice bibliographique
Résumé
In plants, the actin cytoskeleton plays a critical role in defense against diverse pathogens. The formation of actin patches is essential for the intracellular transport of organelles and molecules toward pathogen penetration sites and the formation of papillae for an early cellular response to powdery mildew attack in Arabidopsis thaliana. This response process is regulated by the actin-related protein (ARP)2/3 complex and its activator, the WAVE/SCAR complex (W/SRC). The ARP2/3 complex is also required for maintaining steady-state levels of the defense-associated protein, PENETRATION 1 (PEN1), at the plasma membrane and for its deposition into papillae. However, specific ARP2 functionalities in this context remain unresolved, as knockout mutants expressing GFP-PEN1 reporter constructs could not be obtained by conventional crossing approaches. In this study, employing a CRISPR/Cas9 multiplexing-mediated genome editing approach, we produced an ARP2 knockout expressing the GFP-PEN1 marker in Arabidopsis. This study successfully identified diallelic somatic mutations with both ARP2 alleles edited among the primary T1 transgenic plants, and also obtained independent lines with stable arp2/arp2 mutations in the T2 generation. Further analyses on these arp2/arp2 mutants showed similar biological functions of ARP2 to ARP3 in the accumulation of PEN1 against fungal invasion. Together, this CRISPR/Cas9-based approach offers highly efficient simultaneous disruption of the two ARP2 alleles in GFP-PEN1-expressing lines, and a rapid method for performing live-cell imaging to facilitate the investigation of important plant–pathogen interactions using a well-established and widely applied GFP marker system, thus gaining insights and elucidating the contributions of ARP2 upon fungal attack.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».