Notice bibliographique
Résumé
Introduction In the last decades, adipose tissue (AT) has attracted attention of the scientific and industrial communities for its high therapeutic potential. When focusing on the clinical translation of such type of cells, aspects such as Good Manufacturing Practices (GMP) compliance, scalability, reproducibility, and protocol validation must be ensured. Manufacturing of cells must warrant high quality concerning cell viability, cell yield immunophenotype, and absence of any microbial or pathological contamination. This project focused on the development of a complete manufacturing and cryopreservation process of therapeutic cells for human clinical delivery, ensuring all parameters and characteristics listed above. Materials and Methods The new protocol developed is particularly compact and ensures economies of scale when increasing the volume of processed AT, which reduces manufacturing cost. In this project 100-200g AT/human donor, obtained from liposuction or lipectomy procedures (n=15) were processed under GMP conditions. Stromal vascular fraction (SVF) isolation and cryopreservation was performed using xeno-free and GMP grade reagents. Cell number and viability, before and after cryopreservation, was determined by trypan blue exclusion dye by three operators. Immunophenotype of SVF subpopulations was evaluated by flow cytometry (FACSCanto and FACSDiva software) for the expression of mesenchymal, endothelial, hematopoietic and pericytic markers: CD31, CD34, CD45, CD73, CD90, CD105, CD146 and HLA-DR. Mesenchymal trilineage differentiation was performed to demonstrate potential of the isolated cells. Results The developed xeno-free cGMP procedure for isolation of clinical grade SVF cells resulted in a cell yield of 2.4x105 ±0.9 cells/g AT, and cell viability of 85.4%±7.1, which demonstrated differentiation into mesodermal lineages. After xeno-free cryopreservation cell viability was 80.0%±10.1. Regarding immunophenotype of SVF subpopulations (Fig.1), when considering mesenchymal markers co-expressed with CD341, 12%±5 of the cells presented the CD90+CD34+CD73+CD105+ phenotype, while 1.3%±0.8 of cells expressed concomitant mesenchymal markers in the absence of CD34. Regarding endothelial markers, 15%±6 of the cells are CD45-CD34+CD31+. Preliminary analysis of samples demonstrated no significant difference of phenotypic expression before and after xeno-free cryopreservation. Discussion and Conclusions To the best of our knowledge this project is pioneer in providing clinical grade cryopreserved hSVF, ensuring extremely high viability post-thaw, and maintenance of immunophenotypic characteristics of its sub-populations. This achievement is of great relevance for therapeutic use of adipose tissue regenerative cells. References 1 Scherberich A. et al. World J Stem Cells 5, 1, 2013; 2 Bourin P. et al. Cytotherapy. 0, 1, 2013.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,003 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,003 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,002 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,793 | 0,519 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».